Отчет
о научно-исследовательской работе:
Испытания средства «Биомастим» на безвредность и его влияние на регенеративные процессы.
Реферат
Цель работы - Определение острой, и субхронической токсичности, а также раздражающего, сенсибилизирующего и ранозаживляющего действия средства «Биомастим» предназначенного для обработки сосков вымени после доения.
Безвредность препаратов определяли путем установления их острой и хронической токсичности, раздражающего и сенсибилизирующего действия.
Изучение острой токсичности препаратов проводили на беспородных белых мышах, массой 20-25г в соответствии с «Оценкой биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследование общетоксического действия» (Утвержденной и введенной в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 августа 2009г. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009). В опыте участвовало 44 белых мыши, которым вводили «Биомастим» перорально в следующих дозах: первой группе мышей по 0,1мл; второй группе по 0,3мл; третьей группе по 0,5мл. Оставшиеся мыши составили контрольную группу, им препарат не вводили
В течение последующих 14 дней за животными вели клиническое наблюдение, обращая внимание на общее состояние, аппетит, поведенческие реакции, картину интоксикации, гибель животных.
Изучение субхронической токсичности «Биомастима» изучали на 20 беспородных белых мышах, массой 20-25г в соответствии с «Оценкой биологического действия медицинских изделий. Часть 11. Исследование общетоксического действия» (Утвержденной и введенной в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 августа 2009г. ГОСТ Р ИСО 10993-11-2009). Животные были распределены на 2 группы по 10 мышек в каждой группе. Мышам первой группы «Биомастим» вводили в желудок в дозе 0,3мл 1 раз в день в течение 30 дней. За животными вели пристальное наблюдение, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. По истечению 14 дней после последнего введения препарата 5 мышей были подвергнуты эвтаназии и вскрыты, было изучено патологическое состояние внутренних органов. За остальными мышами продолжали вести наблюдение в течение еще 3 недель, учитывая их поведение, общее состояние и аппетит. По истечению 3 недель, были вскрыты еще 5 мышей для изучения патологического состояния внутренних органов. Мыши второй группы служили контролем, им препарат не вводили.
Изучение раздражающего действия препаратов проводили в 2 сериях опытов на 3-х молодых кроликах-альбиносах одной линии массой 2300-2700г,10 морских свинках-альбиносах массой 250-270г в соответствии с «Оценкой биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия» (Утвержденной и введенной в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 августа 2009 г. ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009). В первой серии опыта для постановки пробы 1 каплю исследуемого средства при помощи глазной пипетки наносили под верхнее веко правого глаза кроликов и морских свинок, в левый глаз (контрольный) ввели 1 каплю изотонического 0,9% раствора натрия хлорида. Во второй серии опыта морским свинкам выстригали участок кожи боковой поверхности туловища, ближе к середине туловища, размером 2х2см. Изучаемое средство наносили на протяжении 4 недель 5 раз в неделю. Реакцию кожи учитывали ежедневно по шкале оценки кожных проб. Исследование проводилось нанесением на боковую поверхность морских свинок изучаемого средства. Средство наносилось равномерным слоем на весь участок аппликации с помощью глазной стеклянной палочки. После 10 накожных аппликаций проводилось тестирование участка кожи, на который наносилось изучаемое средство. Если реакции кожи (эритема, пузырь, микровезикулы) на изучаемое средство не наблюдалось, то число накожных аппликаций доводили до 20, после животных повторно тестировали.
Изучение сенсибилизирующего действия «Биомастим» проводили на 15 морских свинках-альбиносах массой 300-330г (10 - опытных и 5 - контрольных) в соответствии с «Оценкой биологического действия медицинских изделий. Часть 10. Исследование раздражающего и сенсибилизирующего действия» (Утвержденной и введенной в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 6 августа 2009г. ГОСТ Р ИСО 10993-10-2009). За день до начала исследования на подопытных участках кожи тщательно выстригали шерсть. Доза, вводимая внутрикожно в каждый подопытный участок, составляла 0,1мл. Для всех аппликаций использовали кусочки фильтровальной бумаги, пропитанные исследуемым материалом, которые прикладывали на выстриженные участки кожи и фиксировали бинтом вокруг тела животного. Каждому животному в выстриженные участки кожи делали 3 парных внутрикожных инъекции, по 0,1 мл следующих растворов. 1-й раствор для опытных животных - смесь адъюванта Фрейнда с физиологическим раствором 1:1, контрольным животным - физиологический раствор. 2-й раствор для опытных животных - «Биомастим», контрольным животным - физиологический раствор. 3-й раствор для опытных животных - смесь «Биомастима» с адъювантом Фрейнда 1:1, контрольным животным - смесь физиологического раствора с адъювантом Фрейнда 1:1.
Через 7 дней после внутрикожных инъекций начинают накожные аппликации препарата на спину в области лопаток каждого животного, используя для этого пропитанные препаратом кусочки фильтровальной бумаги размером 20*40мм, которые фиксируют бинтом. Повязку и кусочки фильтров удаляют через 48 (±2) часов. Контрольным животным делают тоже самое, но вместо препарата кусочки фильтров пропитывают физиологическим раствором. Затем через 14 дней после фазы местного воздействия проводят провокационную пробу препарата с подопытными и контрольными животными. Для этого делают аппликацию препарата на кожу бока каждого животного, используя кусочки фильтра пропитанного препаратом, которые фиксируют повязкой. Повязку и кусочки фильтров снимают через 24 часа. Поверхность участков осматривают через 24, 48 и 72 часа после снятия повязки. Описывают и оценивают степень кожной реакции.
Изучение влияния «Биомастима» на течение регенеративных процессов в сравнительном аспекте модели экспериментально воспроизведенных инфицированных кожных ран у 20 молодых белых крыс массой 150-200г, взятых из одних пометов и распределенных по принципу пар-аналогов на опытную и контрольную группы. На спине всех животных тщательно выстригали участок 2х2см. Затем трафаретом (острыми краями пробочного пробойника) намечали контуры раны диаметром 1см и вырезали глазными ножницами лоскут кожи. Десяти опытным крысам на раневую поверхность наносили «Биомастим», а 10 контрольным - «Depal». После этого раны покрывали марлевой салфеткой, которую фиксировали лейкопластырем. Для более надежной фиксации повязки ее укрепляли бинтом. Перевязки проводили каждый день.
Результаты исследований
Исследование острой токсичности.
В результате проведенных исследований установлено, что средство для профилактики маститов у коров «Биомастим» при назначении внутрь, даже в максимально возможной для внутреннего применения дозе 0,5мл для мышей в течение всего периода наблюдений не вызывала гибели и острой интоксикации подопытных животных. У животных не отмечено отрицательных явлений в поведении, рефлексы сохранялись. По истечении срока наблюдений подопытных животных подвергли эвтаназии, вскрыли с проведением патологоанатомического исследований внутренних органов, при этом выраженных патологических изменений не обнаружили.
Таблица 1 - Результаты определения острой токсичности Биомастима при однократном пероральном введении
| Группы | Вид животных | Количество животных, голов | Дозы препарата | Из общего количества животных в группе | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| на 1 животное, мл | мл/кг | выжило | пало | |||
| 1 группа | Белые мыши |
11 | 0,1 | 5,0 | 11 | 0 |
| 2 группа | Белые мыши |
11 | 0,3 | 15,0 | 11 | 0 |
| 3 группа | Белые мыши |
11 | 0,5 | 25,0 | 11 | 0 |
| 4 группа (контроль) | Белые мыши |
11 | - | - | 11 | 0 |
Исследование субхронической токсичности
В течение всего периода наблюдений, как в опытной, так и в контрольной группе гибели и острой интоксикации животных не регистрировалось, также не отмечено отрицательных явлений в поведении, рефлексы сохранялись. Животные поедали корм, аналогично животным контрольной группы
При патологическом изучении внутренних органов белых мышей каких-либо изменений в их структуре не наблюдалось. Расположение внутренних органов было правильным. Просвет трахеи и бронхов свободен. Ткань легких розового цвета. Слизистая оболочка желудка и кишечника серо-розового цвета без изъявлений и кровоизлияний. Капсула почки легко снималась, мозговое и корковое вещество хорошо различимы на разрезе. Следовательно, «Биомастим» по степени воздействия на организм теплокровных животных относится к веществам малоопасным (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).
Изучение раздражающего действия «Биомастим» проводили в двух сериях опытов. В первой серии опыта раздражающее действие определяли методом конъюнктивальных проб. Исследование проводили на кроликах, которым на конъюнктиву под верхнее веко правого глаза однократно нанесли одну каплю испытуемого средства (левый глаз служил контролем - 1 каплю стерильного изотонического раствора натрия хлорида). Сразу после закапывания исследуемого средства в глаз не наблюдалось покраснения (гиперемия) конъюнктивы, слезотечения и не отмечали помутнения роговицы, радужная оболочка без видимых изменений, химотоз (отек конъюнктивы) отсутствовал. Через 24-48 часов проводили повторное исследования глаз у животных, которое также не выявило помутнений роговицы, радужная оболочка без видимых изменений, химотоз (отек конъюнктивы) отсутствует.
Во второй серии опыта раздражающее действие «Биомастима» определяли методом накожных аппликаций. Исследование проводили на морских свинках, которым на протяжении 4 недель 5 раз в неделю изучаемое средство наносили на боковую поверхность туловища. После 10 накожных аппликаций проводилось тестирование участка кожи, на который наносилось изучаемое средство. Реакции кожи на изучаемое средство не наблюдалось. Число накожных аппликаций довели до 20. После 20 накожных аппликаций изучаемого средства положительных реакций кожи (эритема, пузырь, микро везикулы) не выявлено. Толщина кожной складки на месте нанесения препарата не увеличилась от исходного состояния.
Таким образом, «Биомастим» не обладает раздражающим воздействием на ткани в зоне его применения.
Изучение сенсибилизирующего действия «Биомастим» определяли методом максимального сенсибилизирующего воздействия. Исследование проводили на морских свинках, которым в выстриженные участки внутрикожно инъецировали по 0,1мл растворов: Опытным животным смесь адъюванта Фрейнда с физиологическим раствором в соотношении 1:1, исследуемый препарат и смесь адъюванта Фрейнда с препаратом в соотношении 1:1. Контрольным животным - физиологический раствор и смесь физиологического раствора с адъювантом Фрейнда в соотношении 1:1. После чего через 7 дней подопытным животным применяли аппликации с препаратом, а контрольным животным с физиологическим раствором на протяжении 48 часов. Через 14 дней проводили провокационную пробу препарата с подопытными и контрольными животными, делая аппликации препарата на кожу бока каждого животного и фиксируя повязкой на 24 часа. Спустя 24, 48 и 72 часа после провокационной пробы и снятия повязки положительных реакций кожи (отек, эритема, пузырь) не выявлено.
Таким образом, препарат не обладает раздражающим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его применения.
Изучение влияния «Биомастима» на течение регенеративных процессов проводили в сравнительном аспекте на модели экспериментально воспроизведенных инфицированных кожных ран у 20 молодых белых крыс массой 150-200г,
Десяти опытным крысам на раневую поверхность наносили «Биомастим», а 10 контрольным - «Depal». После этого раны покрывали марлевой салфеткой, которую фиксировали лейкопластырем. Для более надежной фиксации повязки ее укрепляли бинтом. Перевязки проводили каждый день.
О ходе заживления экспериментальных ран судили по следующим показателям: время проявления грануляций в ране, закрытие дна раны грануляциями, качество грануляций, ход эпителизации, состояние тканей вокруг раны. Как показали наблюдения, у животных опытной группы заживление ран (выполнение их грануляцией, исчезновение гиперемии, отечности и боли, эпителизация с образованием рубца) проходило в среднем на три дня раньше, чем у животных контрольной группы.
Полученные данные позволяют сделать заключение о том, что «Биомастим» благотворно влияет на регенеративные процессы, стимулируя их.
Вывод:
1. При определении острой и хронической токсичности средства «Биомастим» предназначенного для обработки сосков вымени после доения установлено, что он относится к малотоксичным препаратам (4 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76).
2. «Биомастим» не обладает раздражающим и сенсибилизирующим воздействием на ткани в зоне его применения.
3. «Биомастим» благотворно влияет на регенеративные процессы, стимулируя их.