Исследования по использованию
пробиотического препарата Моноспорин
в условиях ГУП СО «Птицефабрика «Свердловская»
на кроссе Ломанн-белый (яичного направления)

В условиях промышленного птицеводства значительно усилилась техногенная и микробиологическая нагрузка на организм птицы. Повышение изменчивости бактерий и вирусов, быстрое развитие их устойчивости к различным антибиотическим веществам, проявление среди условно-патогенных микроорганизмов штаммов с выраженной вирулентностью - все эти факторы нарушают саморегуляцию кишечного биоценоза. При этом причин отхода молодняка основное место занимают болезни желудочно-кишечного тракта, возбудителями которых является условно-патогенная микрофлора.

Кишечный баланс может быть восстановлен с помощью бактерий - симбионтов, дополнительно вводимых птице с водой или кормом. Принцип замещения условно-патогенных микроорганизмов конкурирующими с ними полезными бактериями симбионтами известен как принцип пробиотикотерапии.

Пробиотики - это кормовые добавки, представляющие собой одну или несколько стабилизированных культур симбиотических микроорганизмов, и предназначенные для внесения в желудочно-кишечный тракт животных и птицы.

Не менее важной и актуальной задачей, стоящей перед птицеводами всего мира, является максимальное обеспечение безопасности пищевых продуктов, в том числе яиц и мяса. Особенно это касается содержания антибиотиков в продуктах птицеводства. Яйца и мясное сырье, поступающие для производства продуктов питания, должны отвечать определенным требованиям. В частности, яйцо и мясо птицы должно обладать высокой биологической и пищевой полноценностью. По аминокислотному составу белки должны содержать все незаменимые аминокислоты.

Исследования проводимые на птицефабрике «Свердловская» в июне 2008г. на ремонтных курочках промышленного стада кур несушек, кросса Ломанн белый.

Моноспорин выпаивался с 3 дня жизни в течение 13 дней из расчета 3 мл на 100 голов (опытная группа). Курочки контрольной группы пробиотика не получали. Условия содержания и кормления были одинаковыми, на период и после прекращения испытания. В каждой группе было: контрольной - 22 015 голов, опытной - 20315 голов.

По окончанию проведения испытания в 36 дней был проведен контрольный убой птицы (по 3 головы), взяты для морфологических и гистологических исследований - печень и другие иммунные органы (фабрициева бурса, селезенка, тимус) проводилось исследование грудной мышцы (мяса) на полноценность белков, учитывались зоотехнические показатели. Получены следующие результаты.

Результаты исследования

1.1.1. Морфологическая оценка органов иммунной системы ремонтных курочек

 

Органы иммунной системы подразделяют на центральные и периферические. Связь между ними обеспечивается нервной, эндокринной, кровеносной и лимфатической системами. Важной особенностью иммунной системы является непрерывная циркуляция лимфоцитов между центральными и периферическими органами.

Центральными органами иммунной системы являются красный костный мозг и тимус, а у птиц, кроме того, фабрициева сумка (бурса). В центральных органах происходит первая фаза дифференцировки лимфоцитов, независимая от присутствия антигенов. Здесь образуются достаточно зрелые лимфоциты, имеющие ряд рецепторов и маркеров на мембране, но еще физиологически неактивные, неспособные выполнять свои специфические функции.

Будущие, или пре-Т-лимфоциты, выходят из красного костного мозга и через кровь попадают в тимус - вилочковую железу. Здесь они заселяют корковую зону, где активно размножаются и созревают, обучаются распознавать свои клетки, приобретают различные рецепторы и маркеры на мембранах. В этих процессах участвуют гормоны тимуса. Постепенно зрелые Т-лимфоциты переходят в мозговую зону тимуса, а оттуда - в кровеносные сосуды.

Т-лимфоциты, не обладающие свойством распознавать свои и чужие клетки, подлежат уничтожению макрофагами до выхода их из тимуса в кровоток. Около 95% Т-лимфоцитов погибают в тимусе, и только малая их часть попадает в кровоток. Этим предотвращается развертывание иммунной реакции против собственных клеток и тканей.

Характерной особенностью тимуса является его возрастная инволюция. Уже после подсосного периода тимус начинает уменьшаться в размерах, особенно значительная атрофия наступает в период полового созревания. Хотя полностью, по-видимому, тимус не исчезает, его значение теряется. К этому времени в организме накопилось уже достаточное количество долгоживущих клеток памяти, а регуляторные и эффекторные Т-лимфоциты пролиферируют (размножаются) в периферических иммунных органах.

При гистологическом исследовании тимуса ремонтных курочек в возрасте 36 дней было обнаружено, что и в контрольной и опытной группах иммунная система хорошо сформирована. Отличительным признаком является количество Телец Госсале у птицы разных групп. У птиц опытной группы их на единицу площади было больше и процессы разрушения были не ярко выражены. Фактическое различие было наличие резко выраженной гиперемии микроциркуляторного русла соединительно-тканной основы тимуса, что свидетельствует о напряжении работы организма и некоторой интоксикации организма птицы.

Рис. 1 - Гистологическая картина тимуса ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней.
Четкая очередность корково-мозговой зоны.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 2 - Гистологическая картина тимуса ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней.
Тельц Госсале на единицу площади просматривается меньше, чем опытной группе.
Процессы разрушения более ярко выражены.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 3 - Гистологическая картина тимуса ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней.
Межуточная соединительная ткань. Гиперемия сосудов межуточной соединительной ткани тимуса.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 4 - Гистологическая картина тимуса ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней.
Тельц Госсале на единицу площади просматривается больше, по сравнению с контролем.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 5 - Гистологическая картина тимуса ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней.
Общий вид тимуса. Выраженность корково-мозгового слоев.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

У птиц пре-В-лимфоциты после выхода из красного костного мозга заселяют фабрициеву сумку, где превращаются в В-лимфоциты. У млекопитающих В-лимфоциты все стадии антигеннезависимой дифференцировки проходят в красном костном мозге. Отсюда они выходят в кровоток, имея на поверхности антитела класса IgM, и заселяют периферические иммунные органы.

Клоакальная (фабрициева) сумка - bursa cloaca-lis - лимфоэпителиальным полостной орган. Имеется только у птиц. Для фабрициевой сумки характерно интенсивное развитие в период раннего онтогенеза и полная инволюция у взрослых птиц. Различают несколько стадий в развитии сумки: стадия роста (до 2-недельного возраста), зрелости (до 5-8 недель), ранней инволюции (до 9-15 недель), поздней инволюции (до 25-30 недель), остаточная стадия (после 30 недель) до полного исчезновения.

Гистологическое строение. Стенка клоакальной сумки состоит из слизистой, мышечной и серозной оболочек. Серозная оболочка имеет обычное строение. Мышечная оболочка является продолжением мышечной оболочки клоаки и состоит из двух слоев мышечных пучков, направленных под углом друг к другу. Слизистая оболочка у кур образует 12-14 складок, заметных невооруженным глазом в период «расцвета» фабрициевой сумки. Слизистая оболочка состоит из покровного эпителия и собственной пластинки, в массе которой залегают лимфоэпителиальные фолликулы. Покровный эпителий многорядный, цилиндрический, с неровным рельефом. Над фолликулами эпителий ниже, чем в участках складок, свободных от фолликулов. Собственная пластинка слизистой оболочки образована сетью тонких коллагеновых и ретикулярных волокон, окружающих фолликулы. В петлях ретикулярной ткани находятся фибробласты, плазматические клетки, эозинофильные и псевдоэозинофильные гранулоциты, лимфоциты, макрофаги, тучные клетки.

В каждой складке слизистой оболочки залегает два ряда лимфоэпителиальных фолликулов. У месячных цыплят они лежат плотно, их общее число достигает 8-12 тыс. Каждый фолликул состоит из периферической корковой и центральной мозговой зон. Корковая зона представляет собой ретикулярную ткань, заполненную малыми и средними лимфоцитами, которые здесь образуются.

Мозговая зона светлее, образована эпителиальной тканью, которая приобрела вид сети. Здесь находятся большие и средние лимфоциты. Зоны разграничены капиллярной сетью и базальной мембраной, на которой виден слой клеток, являющихся продолжением покровного эпителия.

Клоакальная сумка вместе с тимусом, с которым они обмениваются клетками, является ключевым органом иммуногенеза. Полное развитие фабрициевой сумки совпадает с периодом становления иммунологической зрелости организма, инволюции - с периодом полового созревания, когда значительно повышается выработка половых гормонов.

При сравнении гистологичитеских препаратов бурсы ремонтных курочек контрольной и опытной группы цыплят было выявлено следующее:

У контрольной группы - границы коркового и мозгового вещества фолликула не четко контурирован. Фолликулы крупные, просветленные. Эпителий не равномерный, от истонченного до гипертрофированного. Соединительно тканные прослойки узкие, не четко обозначенные.

У птиц опытной группы - фолликулы равномерно развиты, границы слоев хорошо очерчены. Корковый слой - компактный, мозговой - разреженный. Соединительно тканные прослойки рельефно отделяют один фолликул от другого. Эпителий равномерно развит, ядра эпителиальных клеток располагаются у базального края, апикальный край - четко выражен.

Рис. 6 - Гистологическая картина фабрициевой бурсы ремонтных курочек
контрольной группы, возраст 36 дней. Фолликулы равномерно окрашены.
Граница корковой мозговой зоны - выражена. Эпителий четко контурирован.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 7 - Гистологическая картина фабрициевой бурсы ремонтных курочек контрольной группы,
возраст 36 дней. Фолликулы крупные, просветленные, складки бурсы.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 8 - Гистологическая картина фабрициевой бурсы
ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Фолликулы равномерно развиты.
Выраженная и четкая граница корковой и мозговой зоны. Эпителий четко контурирован.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Периферическими органами иммунной системы являются селезенка, лимфатические узлы, лимфатические фолликулы, кожа. Здесь происходит антигензависимая дифференцировка В-лимфоцитов, т.е. их активация и пролиферация в результате встречи с антигенами, вырабатываются и накапливаются антитела и разыгрываются иммунные реакции.

Лимфоидная ткань селезенки участвует преимущественно в иммунных реакциях гуморального типа. В ней происходит обмен лимфоцитами между кровью и лимфоидной тканью, а во время иммунного ответа накапливаются плазматические клетки. Поскольку в селезенке нет лимфатической системы, циркуляция лимфоцитов осуществляется только через кровеносные сосуды и красную пульпу.

Селезенка осуществляет контроль за цитологическим составом крови, в ней разрушаются и удаляются из крови утратившие функциональную активность эритроциты и лейкоциты («кладбище эритроцитов»).

Сравнительная оценка процессов происходящих в селезенке ремонтных курочек контрольной и опытных групп показала следующую картину. В опытной группе эпителиальные центры отвечающие за выработку иммунитета были наиболее активизированы, а в красной пульпе селезенки процесс разрушения эритроцитов был выражен гораздо слабее, чем у представителей контрольной группы.

Феномен активного разрушения эритроцитов и отложения гемосидерина свидетельствует об интоксикации организма, что подтверждено нашими исследованиями при просмотре препаратов печени, тимуса.

Рис. 9 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. В поле зрения просматриваются единичные сформированные лимфоидные фолликулы селезенки.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 10 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. Светлые центры размножения селезенки.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 11 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. Очаговые кровоизлияния.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 12 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Активизация светлых центров размножения селезенки.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 13 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Четко выраженная активизация лимфоидных фолликулов селезенгки.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 14 - Гистологическая картина селезенки ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Четко выраженный активизированный лимфоидный фолликул.
Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

В организме происходит постоянная рециркуляция лимфоцитов между центральными и периферическими органами. Из костного мозга пре-Т-лимфоциты переходят по кровеносным сосудам в тимус, затем мигрируют в лимфатические узлы и селезенку, где заселяют тимусзависимые зоны. Оттуда они поступают в кровь или лимфу. В области капилляров и венул Т-лимфоциты проходят по межклеточным щелям через эпителиальный барьер, проникают в ткани, а затем - в лимфатические капилляры и с током периферической лимфы заносятся в лимфатические узлы. Выйдя из них лимфоциты через грудной лимфатический проток снова оказываются в крови.

Иммунный надзор над всеми регионами организма, его органами и тканями, создает возможность и обеспечивает функционирование иммунной системы как единого целого.

 

1.1.2. Морфологическая оценка состояния печени ремонтных курочек

 

Печень - самая крупная железа организма, особенно в эмбриональный период, когда она является органом кроветворения и занимает большую часть брюшной полости. Функции печени разнообразны. Как пищеварительная железа она вырабатывает желчь, которая эмульгирует жиры, омыляет жирные кислоты, усиливает действие ферментов поджелудочной железы. Печень выполняет барьерную функцию, обезвреживая экзогенные и эндогенные токсины, попадающие в кровь из желудочно-кишечного тракта, в том числе ядовитые продукты белкового метаболизма, превращая их в мочевину. В печени депонируются углеводы, витамины A, D, Е, К, кровь (до 20%), синтезируются важнейшие белки плазмы крови (фибриноген, глобулины, альбумины, протромбин), фосфопротеины, витамин В12. В общей сложности печень в организме выполняет свыше 500 функций.

При сравнении гистологических препаратов печени ремонтных курочек в возрасте 36 дней контрольной и опытной групп было выявлено, что и в том и другом случае в печени наблюдается ряд патологических и компенсоторных процессов. Глубина и сила этих процессов не равнозначна

Так у птиц контрольной группы постоянно отмечалось явление зернистой дистрофии гепатоцитов расширенные сенусойдой и разрастание соединительно-тканных элементов в зоне расположения триады. Особенно ярко представлены перихолангиально. Здесь же постоянно обнаруживается полиморфно клеточная инфильтрация, свидетельствующая о восполительном процессе.

В кровеносных сосудах триады постоянно обнаруживается тромбоз сосудов венозной системы с выпадением пигмента - гемосидерина, как показателя внутри сосудистого гемолиза и давности патологического процесса.

У птиц опытной группы так же были обнаружены явления образования тромбов, но менее выражены циротические процессы, имели характер обратного развития. В этих участках как подтверждение этого феномена, постоянно обнаруживаются макрофаги и лейкоциты, которые и способствовали разрастанию фибриозной ткани.

Феномен тромбообразования мы так же обнаружили, но это были свежие, вновь формировавшиеся, рыхлые тромбы.

Обменные процессы (белковый обмен) нормализован, цитоплазма клеток печени была однородно окрашена и не имела тенденции к зернистости.

Рис. 15 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. Зернистая дистрофия гепатоцитов печени. Лейкоцитарные не плотные инфильтраты в пересинусоидальных пространствах. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 16 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. Тромбоз кровеносных сосудов печени. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис.17 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек контрольной группы, возраст 36 дней. Зернистая дистрофия. Холангит. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 18 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Кровеносные сосуды печени. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 19 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Застойная гиперемия микроциркуляторного русла печени обнаружена, но имеет слабо выраженный характер. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

Рис. 20 - Гистологическая картина печени ремонтных курочек опытной группы, возраст 36 дней. Феномен тромбообразования в сосудах печени. Тромбы свежие, вновь формировавшиеся, рыхлые. Окраска гематоксилином и эозином. Ув.х

 

1.1.3. Химический состав и биологическая полноценность мышечных волокон

 

Биохимический состав мяса зависит от полноценности кормления. Рацион прежде всего должен обеспечивать физиологические потребности птицы в обменной энергии, питательных и биологически активных веществах для сохранения здоровья. Не сбалансированность компонентов рациона и их недостаток, может привести к нарушению обмена веществ, не правильному усвоению компонентов рациона, замедлению скорости роста молодняка, снижению продуктивности и плодовитости птицы, проявлению различных заболеваний и даже гибели (И.И.Кочиш, М.Г.Петраш и др.,2007).

Биологическая ценность мяса, прежде всего, определяется полноценностью его белков, то есть содержанием и соотношением незаменимых кислот (А.П.Агеечкин, Ф.Ф.Алексеев и др., 2005). Потенциальную биологическую полноценность протеина мяса определяли методом расчета величины качественного белкового показателя (КБН), представляющего собой количественное соотношение триптофана к оксипролину. Триптофан содержится только в полноценных белках, оксипролин - только в соединительно-тканных белках мяса. Чем выше соотношение триптофана к оксипролину, тем больше полноценных белков содержится в мясе и тем выше его биологическая полноценность (Н.П.Третьяков, 1985; А.И.Жаринов, 1994; Л.В.Антипова, 2001).

Для определения влияния пробиотического препарата Моноспорин на химический состав и биологическую полноценности мышечных волокон в конце выращивания был проведен контрольный убой и анатомическая разделка тушек (табл.1)

Таблица 1 - Биохимический состав и полноценность
мышечных волокон (грудные мышцы, n=3), в %

Показатели	Контрольная группа	Опытная группа	+/-, %
Сухое вещество	24,92	26,11	+1,19
Остаточный жир	0,61	0,75	+0,14
Протеин	23,4	24,9	+1,5
Зола	1,42	1,44	+0,02
Триптофан	148,0	154,0	+6,0
Оксипролин	54,0	38,0	-13,0
Соотношение триптофана: оксипролину или КБП (коэффициент биологической полноценности протеина)	2,74	4,05	+1,31 (+32%)

В результате анализа химического состава мышечных волокон грудных мышц ремонтных курочек, представленных в таблице установлено, что введение пробиотического препарата Моноспорин способствовало увеличению сухого вещества (на 1,19%), остаточного жира (на 0,14%), протеина (на 1,5%), золы (на 0,02%) в грудных мышцах курочек опытной группы по сравнению с контрольной группой.

Тенденция увеличения содержания в грудных мышцах у курочек опытной группы сохранилась и в отношении количества триптофана, по сравнению с контрольной группой на 6%, при одновременном снижении содержания оксипролина на 13% соответственно.

Проведенные исследования показали, что введение пробиотического препарата Моноспорин в ранний постэмбриональный период способствует повышению биологической полноценности мяса у ремонтных курочек опытной группы на 32% по сравнению с контролем.

 

1.1.4. Изучение влияния пробиотического препарата Моноспорин на производственные показатели выращивания ремонтных курочек промышленного стада кур-несушек кросс «Ломанн-белый»

 

Таблица 3 - Результаты производственного испытания
по применению пробиотического препарата Моноспорина
в зале - 204, корпус № 91 (в май-июнь 2008г.)

Показатели	Ед. изм.	Группы
		Контрольная 203 зал	Опытная 204 зал
Принято голов	гол.	22015	20315
Отход, в том числе обезноженных	%	0,96	0,91
Сохранность	%	98,3	98,51
Деловой выход	%	97,5	98,3

Анализ зоотехнических данных по выращиванию ремонтных курочек с 1 по 90 дн. кросса Ломан белый подтвердил положительную тенденцию в пользу курочек опытной группы при использовании пробиотического препарата Моноспорин по рассматриваемым показателям: снижение отхода молодняка на 0,21%, увеличение сохранности на 0,21% и деловой выход на 0,76% по сравнению с контролем.

На основании результатов производственного опыта была рассчитана экономическая эффективность использования пробиотического препарата Моноспорин в ранний постэмбриональный период на ремонтных курочках кросс Ломанн-белый. При стоимости деловой курочки (например 110 руб./гол) 1 рубль затрат на Моноспорин «сохраняет» для предприятия 3,73руб. за счет более высокой сохранности и делового выхода курочек в опытной группе, даже без учета будущей прибыли от снесенных и реализованных яиц.

В заключении можно отметить, что использование пробиотических препаратов с первых дней жизни цыплят способствует нормальному формированию микрофлоры кишечника, защищает организм от проникновения патогенной микроорганизмов и их токсинов.

Применение препаратов Моноспорин в ранний постэмбриональный (предстартовый) период позволяет получать здоровую птицу с высоким процентом сохранности и делового выхода. Так же необходимо отметить, что в мышечном волокне курочек опытной группы больше откладывается полноценных аминокислот, это свидетельствует о нормализации белкового обмена.